Mhoileciuilich bith-eòlasach dòighean-obrach rannsachaidh agus iad a 'cleachdadh

Mhoileciuilich bith-eòlasach dòighean-obrach rannsachaidh a 'cluich pàirt chudromach ann nuadh-leigheis, saidheans foireansach, agus bith-eòlas. Taing gu adhartasan ann an rannsachadh DNA agus RNA, an neach a tha comasach air rannsachadh a dhèanamh air genome na fàs-bheairt a 'dearbhadh an causative àidseant, ag aithneachadh a' miannachadh a nucleic acid ann am measgachadh de acids, etc.

Mhoileciuilich-bith-eòlasach dhòighean-obrach. Dè tha seo?

Air ais ann an 70-80s an luchd-saidheans a bha a 'chiad dhut daonna genome. Thug an tachartas seo brosnachadh gu bhith a 'leasachadh ginteil innleadaireachd agus Mhoileciuilich bith-eòlas. Sgrùdadh na feartan DNA agus RNA tha a 'ciallachadh gu bheil e comasach a-nis a' cleachdadh seo nucleic acids airson adhbhar tinneas bhreithneachadh, sgrùdadh gine.

Ullachadh DNA agus RNA

Mhoileciuilich bith-eòlasach breithneachaidh dòighean feumach air tòiseachadh stuth: tric seo nucleic acid. Tha grunn dòighean gus a thaghadh sin stuthan bho na ceallan de bheairtean beò. Tha gach aon air na buannachdan agus eas-bhuannachdan, agus bu chòir beachdachadh nuair a bhith a 'taghadh dòigh sgaradh nucleic acids ann an riochd fìor-ghlan.

1. Ullachadh DNA le Marmur. Tha an dòigh air a dhèanamh suas ann an dèiligeadh measgachadh de stuthan deoch-làidir, precipitates thoradh air fìor-ghlan DNA. An call air an dòigh seo a tha a 'cleachdadh stuthan puinnseanta a thaobh, agus phenol chloroform.

2. Iomallach de DNA air an leudachadh. Tha am prìomh stuth a tha air a chleachdadh an seo - tha guanidine thiocyanate (GuSCN). Tha e a 'brosnachadh tasgadh de deoxyribonucleic acid air speisealaichte mònach, bhon a tha e a Faodar an dèidh sin a' cruinneachadh le dhòigh shònraichte bufair. Ach GuSCN - 'S e inhibitor an TCP, agus fiù' s bloigh bheag a 'dol a thasgadh ann an DNA urrainn buaidh a thoirt air a' chùrsa an polymerase sèine-bhualadh, a tha cudromach nuair a tha ag obair le nucleic ri tachartasan shearbhagan.

3. sileadh de truailleadh. Tha an dòigh eadar-dhealaichte bhon fheadhainn a bh 'ann roimhe ann gu bheil an molecules dhaibh fhèin chan eil iad a thasgadh dehoksiribonukleinovoy acid agus truailleadh. Gus seo a dhèanamh, a 'cleachdadh an ion exchangers. Tha ana-cothrom a tha ann nach eil a h-uile stuthan shocrachadh.

4. Mass sgrìonaidh. Tha an dòigh seo a chleachdadh ann an cùisean nuair nach eil thu a dh'fheumas a bhith ceart fiosrachadh mu structar an DNA moileciuil sa chruinne, agus am feum a 'faighinn an cuid de staitistig. 'S e an t-adhbhar gu bheil an nucleic acid structar Faodar detergents mhilleadh nuair a làimhseachadh, gu sònraichte alkalies.

Seòrsachadh na dòighean-obrach rannsachaidh

All Mhoileciuilich-bith-eòlasach de dhòighean rannsachaidh a roinn ann an trì prìomh bhuidhnean:

1. Tha leudachadh (a 'cleachdadh ioma-ghnèitheachd de enzymes). Tha seo a 'gabhail a-steach PCR - polymerase sèine-bhualadh, a' cluich pàirt chudromach ann am mòran de na dòighean breithneachail.

2. Neamplifikatsionnye. Tha am buidheann seo de dhòighean-obrach a tha co-cheangailte gu dìreach le obair na nucleic acid measgachaidhean. Eisimpleirean Tha 3 seòrsa blots, in situ gintinn eadar gnèithean, etc.

3. Dòighean-obrach stèidhichte air a 'chomharra air an comharra bho na deuchainn moileciuil sa chruinne, a cheangaileas gu sònraichte DNA no RNA deuchainn. Example - gintinn eadar gnèithean siostam Hybride Ghlacadh System fuasgladh (CnG2).

Enzymes a dh'fhaodar a chleachdadh ann an dòighean-obrach rannsachaidh Mhoileciuilich bith-eòlasach

Tha mòran Mhoileciuilich breithneachaidh gabhail a-steach dòighean-obrach a 'cleachdadh raon farsaing de enzymes. Gu h-ìosal air an cleachdadh na bu trice:

1. bacadh enzyme - "gearradh" an DNA moileciuil sa chruinne gu pàirtean riatanach.

2. DNA polymerase - synthesizes-dùbailte air tìr deoxyribonucleic acid moileciuil sa chruinne.

3. Reverse transcriptase (reverse transcriptase) - air a chleachdadh gus co-chur DNA bho RNA template.

4. DNA ligase - a tha uallach airson a 'cruthachadh dàimhean eadar phosphodiester nucleotides.

5. exonuclease - nucleotides air falbh bho cheann an cuibhreann de na deoxyribonucleic acid moileciuil sa chruinne.

PCR - bunaiteach dòigh DNA leudachadh

Polymerase slabhraidh reaction (PCR) ga chleachdadh gu bitheanta ann an nuadh Mhoileciuilich bith-eòlas. Tha an dòigh seo, anns a bheil aon DNA moileciuil sa chruinne-Gheibhear àireamh mhòr de lethbhreacan (amplifying moileciuil sa chruinne-).

Tha prìomh dhreuchdan PCR:

- breithneachadh air tinneasan;

- cloning DNA earrannan, Gene.

Gus a dhèanamh an polymerase slabhraidh reaction Feumaidh na leanas eileamaidean: a 'chiad DNA moileciuil sa chruinne, a thermostable DNA polymerase (Taq no Pfu), deoxyribonucleotide phosphates (stòran naitridean buinn), an primers (2 primer 1 DNA moileciuil sa chruinne-) agus fhèin bufair siostam a dh'fhaodadh a dhèanamh a h-uile ath-bhualaidhean.

PCR a dhèanamh suas de thrì ceuman: denaturation, primer annealing agus elongation.

1. denaturation. Aig teòthachd 94-95 puing Celsius proshodit bhriseadh an haidridean dàimhean eadar an dà slabhraidhean de DNA, agus mar thoradh air dà faigh sinn aon-tìr molecules.

2. annealed primers. Aig teòthachd 50-60 ceuman centigrade tachairt Inntrigidh primers aig cinn nan aon-tìr nucleic acid molecules a rèir an t-seòrsa chòrdadh.

3. Elongation. Aig teòthachd 72 puing a synthesized nighean dùbailte air tìr deoxyribonucleic acid molecules.

DNA òrdachaidh

Mhoileciuilich bith-eòlasach dòighean-obrach rannsachaidh tric feum air eòlas ann an òrdugh nucleotides ann moileciuil sa chruinne de deoxyribonucleic acid. Gus co-dhùnadh an ginteil code òrdugh. Mhoileciuilich breithneachaidhean an àm ri teachd bidh iad stèidhichte air an eòlas a gheibhear ann an co-dhùnadh an duine sreath.

Tha na leanas sheòrsaichean òrdachaidh:

• òrdachaidh le Maxam-Gilbert;
• Sanger òrdachaidh;
• pyrosequencing;
• nanoporovoe òrdachaidh.